alkov.su

Прогноз при люминальном раке молочной железы со статусом негативный her2

Анализ дозы гена HER2/neu при раке молочной железы (РМЖ)

Рак молочной железы представляет собой наиболее распространенную форму онкологической патологии у женщин. Заболеваемость раком молочной железы в России на конец 2011 года составила 45,2 случая на 100 тысяч женщин, занимая 20,4 % в структуре общей онкологической заболеваемости. Ежегодно в России выявляется более 57 тыс. новых случаев РМЖ. Корректный выбор пре- и постоперационной терапии, прогноз развития опухоли, оценка вероятности рецидива во многом опираются на исследование прогностических и предсказательных маркёров.

20,4 % в структуре общей онкологической заболеваемости занимает рак 20,4 % в структуре общей онкологической заболеваемости занимает рак молочной железы.

Что такое HER2?

Рецептор HER2 − один из наиболее значимых молекулярных маркёров при раке молочной железы (РМЖ). В нормальном состоянии рецептор HER2 располагается на поверхности многих клеток организма. Примерно у каждой четвертой женщины, больной РМЖ, количество этого белка в клетках опухоли повышено по сравнению с нормой. В основе увеличенной экспрессии лежит амплификация гена HER2/neu. Избыточное количество этого рецептора на поверхности раковых клеток свидетельствует о высокоагрессивной форме РМЖ.

Что такое высокоагрессивная форма РМЖ?

Злокачественное новообразование в молочной железе с амплификацией и увеличенной экспрессией гена HER2/neu. Опухоль данного типа ведет себя крайне агрессивно и быстро метастазирует в другие органы. Больные РМЖ с положительным HER2-статусом имеют плохой прогноз и низкую выживаемость (1-2 года с момента постановки диагноза). Заболеванию подвержены женщины в репродуктивном возрасте. Опухоль с положительным HER2-статусом не реагирует на традиционные линии химиотерапии.
Количество больных РМЖ с HER2-положительным статусом: HER2-положительный статус опухоли выявляется у 25-30% всех пациентов с РМЖ (около 15 тыс. новых случаев в год). В России около 90 000 тыс. женщин с РМЖ с положительным HER2-статусом. Из них выявлено и состоит на учете только 3 425 пациенток.

Кто должен пройти процедуру обследования?

Все женщины с выявленным РМЖ должны пройти проверку на определение HER2-статуса в клетках опухоли, поскольку этот статус крайне важен как для прогноза, так и для подбора адекватного лечения. Проверка статуса позволяет врачу с большей точностью определить, к какому из типов рака относится данная конкретная опухоль, уточнить диагноз и подобрать в индивидуальном порядке наиболее подходящее лечение. На сегодняшний день анализ дозы гена HER2/neu при метастатическом раке молочной железы рекомендован Европейским обществом онкологов как необходимый элемент исследования больного.

Почему важно знать HER2-статус опухоли РМЖ?

Положительный HER2-статус опухоли важен сразу с нескольких точек зрения:
• Позволяет врачу оценить склонность опухоли к прогрессированию;
• Определить реакцию организма на предложенное лечение.

Показано, что для пациентов с положительным HER2-статусом опухолей при химиотерапии неэффективно использование Метатрексата и Тамоксифена, а использование антрациклинов и платиносодержащих препаратов наоборот более эффективно, таксаны и ингибиторы ароматазы одинаково эффективны, вне зависимости от HER2-статуса опухоли. Анализ дозы гена HER2 позволяет узнать, имеет ли смысл назначать лечение Герцептином.

Что такое Герцептин?

Герцептин (Roche, Швейцария) является ярким представителем класса таргетных препаратов, на основе моноклональных антител, которые с высокойстепенью избирательности связываются с внеклеточной частью рецептора HER2. Благодаря этому действию поражение раковых клеток становится более направленным, адресным и щадящим по отношению к здоровым клеткам организма. После того как Герцептин блокирует HER2-рецепторы на поверхности раковой клетки, ее дальнейший рост прекращается и в ряде случаев наблюдается уменьшение опухоли. Кроме прямого антипролиферативного действия Герцептин способен вызывать уничтожение опухолевых клеток за счет реакции антитело-зависимой клеточной цитотоксичности. Использование Герцептина позволяет увеличить время до прогрессирования и общую выживаемость больных с гиперэкспрессией HER2/neu, преодолеть резистентность опухоли к цитостатическим препаратам и уменьшить дозу химиотерапии, и, как следствие, дает шанс продлить отпущенные болезнью годы жизни.

Установление HER2 статуса

В подавляющем большинстве случаев в основе увеличенной экспрессии лежит амплификация гена HER2/neu, для определения HER2-статуса опухоли мы предлагаем анализ дозы гена HER2/neu в клетках опухоли с помощью ПЦР в реальном времени. Данная технология имеет хорошую корреляцию с иммуногистохимическим (ИГХ) методом диагностики HER2-статуса опухолей (1). Кроме того, ПЦР в реальном времени является прекрасной альтернативой тест-системы на основе флуоресцентной гибридизации in situ (FISH), которая была рекомендована Управлением по контролю за качеством пищевых продуктов и лекарственных средств (США) как стандартный метод диагностики HER2-статуса опухолей при прогнозировании течения РМЖ (2, 3).

Материал для исследования

Для анализа используется ДНК из ткани опухоли РМЖ, полученных во время биопсии или операции. Кроме того, для анализа может быть использована ДНК, выделенная из архивных образцов ткани опухоли РМЖ заключенных в парафиновые блоки.

HER2- статус рака молочной железы

Рак молочной железы является основной причиной онкологической смертности среди женщин в мире. Он составляет почти 11% от числа всех онкологических заболеваний и занимает первое место в мире по распространенности. К счастью, во многих развитых странах смертность от рака молочной железы значительно снизилась за последние 20 лет, что обусловлено как появлением новых лекарственных средств (химиотерапии и биологических веществ), так и улучшением скрининга и раннего выявления опухолей.

Рецептор человеческого эпидермального фактора роста 2 типа (HER2)

HER2 представляет собой трансмембранный белок, играющий ключевую роль в передаче сигналов факторов роста. HER2 входит в семейство HER-белков, включающих рецепторы факторов роста четырех типов: HER1 (также известный как рецептор эпидермального фактора роста EGFR), HER2, HER3, HER4.

В здоровой ткани HER2 передает сигналы, регулирующие пролиферацию и выживаемость клеток, но гиперэкспрессия HER2 может обусловить злокачественную трансформацию клеток. Связь гиперэкспрессии HER2 и канцерогенеза лучше изучена на модели рака молочной железы, однако HER2 также является важным маркером рака желудка и пищеводно-желудочного перехода (16% рака желудка или пищеводно-желудочного перехода являются HER2-позитивными, то есть в них регистрируется гиперэкспрессия белка (ИГХ 2+/FISH-положительный или ИГХ 3+)).

Определение HER2 статуса крайне важно, так как на основании результата исследования принимается решение о тактике лечения пациента . Если опухоль HER2-позитивная, пациенту показана таргетная анти-HER2 терапия. При HER2-негативных опухолях такая терапия не показана в связи с ее низкой эффективностью.

Актуальные подходы к лечению рака молочной железы сегодня включают комбинацию химиотерапии, гормонального лечения, применения биологически препаратов и хирургического лечения и/или радиотерапии. Для пациентов с HER2-позитивными опухолями ранних стадий или метастатическим раком молочной железы таргетная анти-HER2-терапия в сочетании с химиотерапией является современным стандартом лечения.

Несмотря на то, что HER2-положительный статус является показателем более агрессивного течения опухоли, добавление анти-HER2 препаратов к химиотерапии улучшает течение заболевания у многих пациентов.

Методы определения HER2-статуса

Золотым стандартом HER2-исследования является патологоанатомическое исследование , при котором имеется возможность использования двух методов — ИГХ и гибридизации in situ. Такое сочетание методов дает наиболее полную картину патологического процесса, позволяя оценить как морфологические характеристики объекта исследования, так и количественно интерпретировать экспрессию HER2.

ИГХ представляет собой метод микроскопии в светлом поле и позволяет одновременно с определением HER2-статуса оценить морфологию ткани, также является относительно простым, быстрым и недорогим методом и используется в большинстве патологоанатомических лабораторий

Однако нецелесообразно использовать ИГХ как единственный метод при неопределенном результате тестирования. Критерии оценки ИГХ являются субъективными и полуколичественными, что приводит к появлению ложно-положительных и ложно-отрицательных результатов.

Образцы, оцененные как ИГХ2+, должны быть повторно протестированы с помощью гибридизации in situ для получения точного результата.

FISH — метод микроскопии в темном поле, в котором используются ДНК зонды, связанные с флуоресцентной меткой для количественного определения уровня амплификации гена HER2.

При этом зонд HER2 связывается с локусом гена HER2 на 17 хромосоме, а зонд CEP17 связывается с центромерным участком 17 хромосомы. Результат оценивается как соотношение числа копий гена HER2 к числу копий 17 хромосомы. FISH-положительным считается образец, в котором соотношение HER2:CEP17 больше или равно 2,0.

Гибридизация in situ часто используется для подтверждения неопределенных результатов ИГХ, но также может быть использована как начальный метод определения HER2 статуса опухоли молочной железы. Пациентки, чьи образцы оценены как положительные при гибридизации in situ при первичном ISH тестировании, направляются на анти-HER2-терапию. Когда ИГХ используется в качестве исходной методологии тестирования, гибридизация in situ должна выполняться при всех ИГХ 2 + результатах для подтверждения HER2 статуса и определения количественной оценки амплификации гена HER2.

Метод FISH менее чувствителен к вариациям предварительной обработки на преаналитическом этапе и этапе сбора материала; его интерпретация более объективная и количественная, чем при ИГХ. Метод FISH позволяет определить HER2- положительные случаи внутри неопределенной категории (ИГХ 2+). Однако иногда явление полисомии обуславливает появление ложно-отрицательных результатов гибридизации in situ при ИГХ 3+.

Читать еще:  Основные упражнения для восстановления руки после инсульта

Таргетная терапия наиболее эффективна у пациенток с гиперэкспрессией HER2 (ИГХ 3 + или ИГХ 2 + / ISH-положительные). Считается, что пациентки, образцы которых были оценены как ИГХ 3 + имеют положительный HER2 статус, а ИГХ 0/1 + имеют отрицательный. ИГХ 2 + образцы считаются неопределенными и должны быть повторно протестированы с помощью гибридизации in situ. Образцы ИГХ 2 + / ISH-положительные, классифицируются как HER2-позитивные.

При наличии сомнений относительно результата, оцененного как ИГХ 3+ проводят повторное определение HER2 статуса с использованием другого метода.

Нer2 при раке молочной железы

Злокачественные образования молочной железы относится к самым частым болезням с летальным исходом среди женского населения во всем мире. Они лидируют среди раковых заболеваний, и составляют около 11% от общего числа диагностированных онкологических новообразований.

К большому счастью, современный уровень развития медицины позволил снизить уровень смертности женщин страдающих от рака молочной железы, из-за открытия современных препаратов для химиотерапии, и улучшенному скринингу с возможностью более ранней диагностики.

Перед тем как поставить точный диагноз и начать необходимую терапию рака молочной железы, нужно выяснить биологический портрет опухоли. В комплекс этого описания должно входить:

  • Стадия опухоли;
  • Наличие метастаз;
  • Индекс пролиферативной активности ki-67;
  • Статус HER2.

HER 2 это ген, (Human Epidermal Growth Factor Receptor 2) – человеческий рецептор эпидермального фактора роста 2. Являет собой трансмембранный белок, который имеет, огромную роль в процессах движения сигналов роста на клеточном уровне. HER2 относится к семейству HER-белков, которые состоят из рецепторов фактора роста 4 видов: HER1, HER2, HER3, HER4.

В нормальной физиологии, HER2 способствует передачи сигналов, которые регулируют деление и жизненный цикл клеток, но его гиперэкспрессия может стать причиной злокачественной мутации. Связь гиперэкспрессии HER2 и канцерогенеза хорошо изучена на примере рака груди у женщин (примерно 30% женщин больных раком груди, имеют HER2 позитивный тип) , так же, данный тип онкологического процесса относится к главным маркерам рака ЖКТ (около 15-20% случаев поражения желудка или пищевода относятся к HER2 – позитивным).

Сегодняшнее диагностирование рака, в обязательном порядке включает определение HER2 статуса, опираясь на полученные результаты диагностики, врачи делают прогноз на дальнейшее лечение и выживаемость пациентки. Отличительной чертой HER2 позитивного рака молочной железы считается его повышенная агрессивность (он растет и распространяется намного быстрее, чем HER2 негативный тип). Но невзирая на это, HER2 позитивный рак показывает отличные показатели эффективности терапии специфическими препаратами Герцептин и Лапатиниб, которые не помогут при диагнозе HER2 негативный рак молочной железы.

Диагностика

Наилучшим методом исследования HER2 типа рака, считается патологоанатомическое исследование, которое проводится двумя способами (иммуногистохимия и гибридизация in situ). Эти методики помогают увидеть максимально полную картину патологического процесса, рассчитать морфологическую характеристику и интерпретировать количественную экспрессию HER2.

Иммуногистохимия – является методом микроскопического исследования с применением светлого поля, при котором проводят параллельное определением HER2-статуса, и оценивают морфологию тканей. ИГХ достаточно простой метод, проводится быстро и не требует больших финансовых затрат (чем пользуются многие патологоанатомические лаборатории).

Но полагаться на результаты только этого метода неразумно, так как критерии оценивания ИГХ в большей степени субъективные и полуколичественные, что в некоторых случаях приводит к получению неправильных результатов.

Материал, который был оценен как ИГХ-2 позитивный, необходимо протестировать повторно с использованием метода гибридизации in situ, что бы получить более достоверный результат.

Гибридизация in situ (FISH) – эта методика микроскопического исследования, но уже в темном поле, для которого используют ДНК зонды, которые связанные с флуоресцентной меткой для количественного определения уровня амплификации гена HER2. Методика проведения состоит в связывании HER2 зонда и локусом гена HER2 на 17 хромосоме, в то время как зонд CEP17 связывается с центромерным участком 17 хромосомы.

Полученный ответ исследования оценивают как пропорции числа копий гена HER2 к числу копий 17 хромосомы. FISH-положительным считается образец, в котором соотношение HER2:CEP17 больше или равно 2,0.

В большинстве случаев in situ применяют для подтверждения неопределенных результатов ИГХ, но он может быть использован в роли начального и основного метода.

Те пациентки, которые пользовались методом гибридизации как первичным диагностическим методом, и их образцы оценены как положительные, сразу же направляются на анти-HER2-терапию. Если же в качестве основного метода было применено ИГХ, гибридизация in situ должна выполняться при всех ИГХ 2 + результатах для подтверждения HER2 статуса и определения количественной оценки амплификации гена HER2. Целевое лечение опухоли является эффективной для больных женщин с гиперэкспрессией HER2 (то есть положительный HER2 тип рака).

Сделаны выводы, насчет больных с результатами ИГХ3+, которые имеют положительный HER2 статус, но на ИГХ 0/1+ — был отрицательный. В таком случае ИГХ2+ образцы считаются неопределенными и подлежат повторному тестированию методом гибридизации in situ. Образец ИГХ 2+/ ISH – положительный, расцениваются как HER2 позитивный.
Если у доктора возникают сомнения насчет результата ИГХ3+, он решает провести повторное определение HER2 статуса, но уже с использование другого метода.

Лечение

Увеличенная активность HER2 рецептора отмечается приблизительно у 1/3 всех больных женщин с диагнозом рак молочной железы, что взаимосвязано с негативными прогнозами насчет протекания процесса и реакцией новообразования на химио и гормонотерапию. Гиперэкспрессия данных рецепторов делает рак в большей степени агрессивным. Это позволяет делать прогноз насчет прогрессирования процесса, и представляет возможность определить цели для нацеленного действия на злокачественные клетки, которые содержат данный рецептор.

Ген HER2, влияет на продукцию белка HER2, относится к протоонкогенам, то есть, не смотря на то, что белок в норме имеет регулирующую функцию, любое отклонение в генах HER2 может стать предрасполагающим фактором к возникновению рака, вот почему в диагностике рака важен показатель статуса HER2.

Около 30% больных раком груди имеют повышенное количество белка HER2. Если сравнивать таких пациентов с женщинами, которые имеют HER2 отрицательный тип, можно выяснить что первая группа поддается более сложному течению онкологического процесса и быстрому развитию, а методы лечения по типу химиотерапии способны только усугубить их состояние.
Особенности HER2+ рака:

  • Существует большой процент того, что он рецидивирует после лечения.
  • Практика показывает, что HER2+ рак слабо реагирует на лечение противоопухолевыми препаратами, которыми проводят стандартное лечение рака молочной железы. Так же, доказаны негативные последствия применения стандартных приемов химиотерапии для лечения данного типа рака, они выражаются в виде увеличения выработки белка, и увеличения скорости роста опухоли.

Начало ранней таргетной терапии препаратом Герцептин, позволяет предупредить раннюю прогрессию образования путем блокировки HER2 рецепторов. Современные специалисты в области онкологии, пользуются передовыми методиками терапии, которые показывают отличные результаты, за счет прямого воздействия на измененные клетки – мишени. Сделаны выводы по поводу приема препарата Герцептин (пациенты, которые начали лечение данным препаратом на ранних стадиях, имеют на 50% ниже прогноз насчет рецидива, нежели те пациенты, которые не лечились данным средством).

Во время использования Герцептина параллельно с химиотерапией, у половины пациентов наблюдают полное исчезновение опухоли. Если остаются небольшие частицы, хирурги с легкость производят их удаление. Выживаемость после такого курса лечения увеличивается в разы, а метастазы не обнаруживаются в течение многих лет.

Препарат Герцептин назначают больным с HER2 позитивным типом опухоли, что можно определить благодаря методам, описанным выше, их должны проводить в лабораториях онкологических диспансеров. Препарат назначается при ИГХ3+, в случае 1+ или 2+ , необходимо использовать еще один метод — FISH.

Лечение Герцептином уместно использовать, исключительно для пациенток с положительной экспрессией HER -2.

Прогноз

Наличие HER2-позитивного рака относится к группе с неблагоприятным прогнозом, и эта форма хуже поддается химио- и гормональной терапии. Но использование прицельного метода лечения и комбинирование его с традиционными, что возможно только при данном типе, существенно повысило шансы на выживаемость и прогноз на успешное лечение этой болезни в последние 10 лет.

Морфологическое тестирование HER2–статуса при раке молочной железы

*Импакт фактор за 2018 г. по данным РИНЦ

Журнал входит в Перечень рецензируемых научных изданий ВАК.

Читайте в новом номере

Современная морфологическая диагностика опухолей требует не только верификации гистологического варианта и степени дифференцировки новообразования, но и обязательной оценки прогноза течения болезни и предсказания ответа на терапию. В этом отношении чрезвычайно важны иммуногистохимический профиль рака, его морфофункциональная характеристика.

В настоящее время для выбора оптимальной лечебной тактики, выбора адекватного лекарственного лечения (антиэстрогены, антроциклиновые антибиотики, Герцептин и т.д.) следует установить не только стадию рака (включая систему TNM), гистологический вариант и степень злокачественности, но и обязательно – фенотип. При раке молочной железы наиболее важными прогностическими показателями являются пролиферативная активность, экспрессия эстрогенов и прогестеронов и, безусловно, экспрессия белка HER2/neu (c–erbB–2). Последняя характеристика, по данным многих исследователей, не только позволяет оценить прогноз болезни, особенно при наличии метастазов в регионарных лимфатических узлах, но и, что особенно важно, включить в лечебный комплекс новый патогенетический препарат «Герцептин» (транстузамаб) – высокоэффективный препарат направленного действия [2,6]. Этот препарат представляет собой рекомбинантное гуманизированное моноклональное антитело, связывающееся с рецептором HER2/neu на поверхности опухолевых клеток. Высокая эффективность Герцептина обусловлена на только иммуноопосредованной цитотоксичностью, но и непосредственным блокированием пролиферации, стимуляцией апоптоза, антиангиогенной активностью [3,5].
HER2/neu – тирозинкиназный трансмембранный рецептор из семейства ERBB, состоящего из четырех функционально связанных рецепторных молекул, играющих важную роль в клеточной дифференцировке, пролиферации, апоптозе. Под действием лигандов HER2/neu образует гетеродимеры с другими рецепторами данного семейства и регулирует работу соответствующих сигнальных каскадов [3,6]. HER2/neu экспрессируется в небольшом количестве и в клетках нормальных тканей. Однако в процессе злокачественного роста происходит его гиперэкспрессия и/или амплификация кодирующего его гена, что доказывается только специальными методами исследования. Установлено, что онкопротеин c–erbB–2 суперэкспрессирован в 20–30% случаев инвазивного рака молочной железы [7].
Однако для использования Герцептина необходимо достоверно подтвердить наличие гиперэкспрессии или амплификации этого гена у каждой конкретной больной, поскольку в противном случае применение дорогостоящего препарата оказывается бесполезным.
Основным методом определения гиперэкспрессии HER2/neu в настоящее время является иммуногистохимический. Проведение иммуногистохимических исследований предъявляет высокие требования к отделению патологической анатомии. Необходимо иметь оборудование (проводящие аппараты, заливочные станции, микротомы высокого класса и др.), позволяющее получать качественный исходный материал и изготавливать тонкие парафиновые срезы, пригодные для иммуногистохимического исследования. Некачественный исходный материал и неправильная постановка иммуногистохимических реакций ведут к неправильной оценке результатов и тем самым – к неадекватному назначению или неназначению препарата.
Иммуногистохимическое исследование проводится на биопсийном и операционном материале, фиксированном 10%–м нейтральным формалином, забуференным фосфатным буфером, в течение 24 часов. Адекватность фиксации и проводки материала является важнейшим фактором получения достоверного результата иммуногистохимического исследования. Гистологическая проводка материала может осуществляться в ручном или автоматическом режиме с использованием проводящих аппаратов. После гистологической проводки материал заливается в парафин и затем готовятся срезы толщиной 4 мкм. Срезы монтируются на специальные высокоадгезивные стекла (Polysine, Histobond, Sialinised Slaid DAKO) и высушиваются в течение 18 часов при температуре 37°С.
Проведение исследования на цитологическом материале не допускается, т.к. количества материала недостаточно для правильной оценки. Следует подчеркнуть, что оценка результатов проводится только в инвазивном раке, т.к. структуры рака in situ, несмотря на выраженную гиперэкспрессию белка, учету не подлежат. Желательно использовать на гистологический материал опухоли, не подвергнутые предоперационной лучевой и/или химиотерапии, поэтому при планировании лечения с предоперационной терапией необходима толстоигольная трепанобиопсия и проведение иммуногистохимического исследования на этом материале. В случае отсутствия материала первичной опухоли возможна оценка гиперэкспрессии на метастатических лимфатических узлах, т.к. в метастазах герцепт–статус опухоли обычно сохраняется.
Иммуногистохимическое исследование (ИГХ) в ручном режиме или с использованием иммуногистостейнера рекомендуется проводить с набором реактивов, готовых к употреблению – DAKO HerceptTest. Возможно также применение концентрированных антител к белку HER2/neu (c–erbB2) и детекционной системы EnVision (DAKO).
Для ИГХ определения гиперэкспрессии HER2/neu при использовании антител как в рабочем разведении, так и концентрированных антител, необходимым этапом является демаскировка антигена. Восстановление антигенной активности с помощью набора «HercepTest» проводится в водяной бане, в растворе Epitope Retrieval Solution (DAKO), pH 6,0 при температуре 95–99°С. Депарафинированные и регидратированные срезы погружают в чашку Коплина с подогретым буфером, помещают в водяную баню при температуре 95–99°С и инкубируют в течение 40 мин. Затем остужают стекла в буфере до комнатной температуры в течение 20 мин. и промывают промывочным буфером 2 мин.
Демаскировку антител можно также проводить в специализированном мини–автоклаве Retrival 2000 (Pick Cell) или в специальной кастрюле под давлением (DAKO) в соответствии с инструкцией к этим приборам в течение 20 мин. при температуре 121 °С или в микроволновой печке – 20 мин. при мощности 500–750 W.
После демаскировки антигена приступают непосредственно к постановке ИГХ реакции, подробно описанной в ряде методических рекомендаций [1,7]. Стандартизация подготовки материала и самого иммуногистохимического исследования становится важнейшим фактором, определяющим достоверность полученного результата и адекватность назначения или неназначения препарата.
При использовании для исследования концентрированных антител применяется та же методика, только предварительно готовится рабочее разведение первичных антител с применением специального разбавителя антител (DAKO).
Исследование всегда проводится с обязательным использованием контрольных стекол с уже известным результатом для контроля правильности реакции и качества реагентов.
При оценке результатов реакции учитывается экспрессия только в инвазивном компоненте опухоли. Оценка результатов реакции проводится с помощью балльной шкалы оценки – 0, 1+, 2+, 3+, разработанной производителем теста и одобренной FDA.
0 – при полном отсутствии продукта реакции или выявлении его на мембранах менее чем 10% клеток опухоли (рис. 1),
1+ – при незначительном количестве продукта реакции на части мембраны более чем 10% клеток опухоли (рис. 2),
2+ – при умеренном количестве продукта реакции на мембранах более чем 10% клеток опухоли (рис. 3),
3+ – при наличии ярко выраженного продукта реакции на протяжении всей мембраны клетки при окрашивании более чем 10% клеток опухоли (рис. 4).
Оценка проводится с использованием светового микроскопа, в основном при увеличении объектива 10х и лишь в пограничных случаях 1+/2+ – объектива 20х. Если мы отмечаем реакцию более чем в 10% клеток при увеличении 20х, то такой результат оценивается как 1+.
Учитывается только мембранное окрашивание, и никогда не принимается во внимание наличие окрашенной цитоплазмы. Цитоплазматическое окрашивание может быть связано как с ошибками в подготовке материала или в постановке реакции, так и нарушением процессов транспорта и формирования рецепторов на клеточной мембране опухолевой клетки. Хотя в этом случае наличие цитоплазматической реакции представляет несомненный научный интерес для назначения лечения герцептином эта реакции не должна учитываться.
Герцепт–статус, оцененный как 0 и 1+, следует считать негативным, т.е. гиперэкспрессия белка и амплификация гена Her–2 отсутствуют. Герцепт–статус, оцененный как 3+, является позитивным, т.е. гиперэкспрессия белка и амплификация гена имеются. При герцепт–статусе 2+ по экспрессии белка на основании иммуногистохимической реакции нельзя уверенно судить об амплификации гена, поэтому требуется исследование, прямо выявляющее наличие или отсутствие амплификации. Таким методом является in situ гибридизация: при использовании флуоресцентной метки – FISH (флуоресцентная in situ гибридизация) и при использовании хромогенной метки – СISH (хромогенная in situ гибридизация) [4]. Оба метода выполняются на срезах с того же образца (блока), на котором проводилось иммуногистохимическое исследование. Эти методы также чувствительны к условиям фиксации и проводки материала. При использовании FISH метода требуется специализированное дорогостоящее оборудование и наборы реагентов, выпускающиеся фирмами Dako и Vysis. Оценка наличия амплификации гена HER2/neu проводится путем подсчета сигналов, которыми помечен центромерный участок 17 хромосомы, и сигналов, метящих ген HER/neu. Если их соотношение больше 2, то это свидетельствует о наличии амплификации (рис. 5,6). При использовании CISH метода (тест–набор фирмы Zymed) используется зонд только к гену HER2/neu и проводится подсчет сигналов, метящих только количество копий амплифицированного гена. При количестве сигналов более 6 результат оценивается как положительный (рис. 7). При пограничных состояниях (3–5 сигналов) применяется дополнительно еще и FISH метод, позволяющий определить количество хромосом, поскольку в опухолевых клетках возможна как анеуплоидия, так и полиплоидия.
Таким образом, для эффективного назначения Герцептина больным раком молочной железы необходимо определение герцепт–статуса опухоли иммуногистохимическим методом и применение методов in situ гибридизации при наличии статуса 2+. Использование этих методов требует соответствующего оснащения патологоанатомических отделений и обучения врачей–патологоанатомов методике проведения и оценке результатов исследования. Иммуногистохимическое определение герцепт–статуса возможно только в крупных сертифицированных онкологических учреждениях, а применение методов in situ гибридизации – только в региональных центрах.
Авторы выражают благодарность Представительству и фармацевтической компании Hoffmann – La Roche в России за помощь в проведении этой работы.

Читать еще:  Что такое сепсис

Лечение и прогноз трижды негативного рака молочной железы

Злокачественные новообразования груди – одно из опасных и распространенных заболеваний. Наиболее неблагоприятным течением отличается трижды негативный рак молочной железы. В силу своих морфологических особенностей эта опухоль трудно поддается лечению гормональными препаратами. Прогноз заболевания зависит от того, на какой стадии оно было выявлено, однако в целом остается неблагоприятным. Чем раньше начато лечение, тем больше процент выживаемости.

Что такое трижды негативный рак молочной железы

Свое название опухоль получила из-за того, что ее элементы дают отрицательные результаты по трем специфическим онкологическим маркерам. У большинства злокачественных опухолей груди клеточные мембраны имеют особые белки-рецепторы. Среди них важное значение имеют 3 вида:

  • рецепторы женских гормонов эстрогенов – ER;
  • белки-рецепторы прогестерона – PgR;
  • рецепторы типа HER 2/neu.

Благодаря существованию этих белков на опухоль удается воздействовать химическими веществами – гормонами или моноклональными антителами. У трижды отрицательного рака молочной железы (ТНРМЖ) нет ни одного из этих видов рецепторов. В силу этого далеко не все способы лечения подходят для борьбы с этой опухолью. Трижды негативный рак отличает быстрое разрастание клеток и формирование метастазов на ранних сроках. По своей гистологической структуре он относится к базальноклеточным или низкодифференцированным протоковым опухолям.

Причины

Формирование очагов раковых клеток в грудной железе зависит от многих причин. К наиболее частым провоцирующим факторам трипл-негативного рака относятся:

  1. Нарушения гормонального баланса в период вынашивания беременности или при климаксе.
  2. Частые сбои менструального цикла, связанные с различными причинами.
  3. Искусственные прерывания беременности хирургическим или медикаментозным путем.
  4. Длительный бесконтрольный прием гормональных противозачаточных препаратов.
  5. Воздействие радиоактивного излучения.
  6. Травмы молочных желез.
  7. Генетическая предрасположенность.

Также рассматривается принадлежность к отдельным этническим группам – в частности, к негроидной расе. Влияют неблагоприятный экологический фон в месте, где проживает женщина, приверженность вредным привычкам, стрессы и переутомления.

У пациенток с диагностированной раковой опухолью нередко выявляют мутации в гене BRCA-1. Эта часть ДНК контролирует выработку веществ, защищающих клетки от ракового перерождения. При изменении структуры гена этот механизм нарушается. Кроме того, активизируется ген FAM83B, в результате нормальные клетки начинают озлокачествляться. Чтобы тройной негативный рак вылечился, проводились попытки удаления этого гена.

Разновидности и классификация

Существует несколько классификаций трипл-отрицательного рака груди. В зависимости от восприимчивости к гормонам выделяют:

  1. Люминальный А тип – эстрогензависимая опухоль. Часто возникает во время менопаузы.
  2. Люминальный В – новообразование, плохо поддающееся лечению.
  3. HER-2-позитивный – чувствительная к эстрогену агрессивная форма болезни.
  4. Базальноподобный вид – наиболее злокачественный тип с самым неблагоприятным прогнозом.
Читать еще:  Какую роль играет медь в крови и какой должна быть ее норма

Существует классификация опухоли по гистологическому строению:

  1. Медуллярный тип рака образуется атипичными элементами в виде полос. Его легко спутать с фиброаденомой.
  2. Метапластический – представлен разными видами опухолей со сходным гистологическим строением.
  3. Протоковый низкодифференцированный – отмечается перерождение протоков железы и разрастание рака в соединительнотканную основу.
  4. Аденокистозный – редкий вид опухоли с низкой дифференцировкой клеток.

Различают несколько стадий роста и развития рака. Для нулевой характерно появление небольшого образования. Оно формируется в пределах одной области и не дает метастазов.

При первой стадии развития раковые клетки выходят за границы той или иной морфологической структуры. Диаметр опухоли может достигать 2 см. Метастазов на этом этапе не наблюдается.

Для второй стадии характерен рост образования в пределах 5 см. Злокачественные клетки не прорастают в соседние здоровые ткани. В прилегающих лимфоузлах на больной стороне выявляются метастазы раковых клеток.

При третьей стадии размеры опухоли превышают 5 см. Регионарные лимфоузлы сильно увеличены и срастаются с окружающей тканью.

Четвертая стадия характеризуется значительными размерами первичной опухоли. Атипичные клетки распространяются в соседние ткани. Метастазы возможны в головной мозг.

Симптоматика

Основной клинический признак трижды негативного рака молочной железы – появление объемного образования. Оно может иметь округлую или неправильную форму. Молочная железа быстро увеличивается в размерах. По мере роста опухоли сосок втягивается, из него появляются выделения. Они имеют жидкую консистенцию, окрашены в желтоватый цвет, иногда с примесью крови.

На ранних этапах развития опухоль безболезненная, плотная. По мере того как образование растет, оно начинает давить на соседние ткани. Женщина ощущает боль, не связанную с фазой менструального цикла. Лимфатические узлы на стороне поражения увеличиваются в размерах. С течением времени кожа на железе становится плотной и похожей на «лимонную корку» – пористой и отечной. Это явление связано с нарушениями оттока лимфы.

Такое образование женщина часто находит у себя случайно. Иногда его определяют во время медосмотра или при медицинских процедурах. При осмотре в подмышечной впадине обнаруживаются увеличенные лимфатические узлы в виде шариков.

По мере того как опухоль прогрессирует, появляются признаки раковой интоксикации. Они возникают из-за распада атипичных клеток. Продукты метаболизма попадают в кровь и разносятся по всему организму, вызывая его отравление. Ведущие симптомы интоксикации – общее недомогание, утомляемость, резкое снижение веса, потеря аппетита. Иногда женщины жалуются на кожный зуд, боль в спине и суставах. При образовании отдаленных метастазов возникают симптомы поражения соответствующих органов. Метастазирование возможно в трубчатые кости, печень, головной мозг и легкие.

Диагностика

Диагноз трипл-отрицательного рака груди ставят, основываясь на жалобах женщины, анамнестических данных, результатах наружного осмотра. Для подтверждения назначаются лабораторно-инструментальные исследования.

При общем осмотре определяются истощение пациентки, снижение веса и бледность кожи. Локальное обследование обнаруживает увеличение в размерах молочной железы, изменения кожных покровов по типу «лимонной корки», выделение жидкости из соска. Пальпаторно определяется опухолевое образование, плотное на ощупь. Лимфатические узлы под мышками увеличены. На начальных стадиях они бывают подвижны, в дальнейшем спаиваются с прилежащими тканями.

При физикальном осмотре могут быть выявлены признаки метастазирования. К ним относятся увеличение размеров печени, ослабление дыхания и очаг притупления легочного звука, боли в костях и суставах.

Инструментальная диагностика включает в себя:

  1. Рентгенографию молочной железы.
  2. Ультразвуковое исследование.
  3. Компьютерную и магниторезонансную томографию.
  4. Оптическую маммографию.

Эти методы позволяют выявить новообразование в молочной железе, а также возможные метастазы.В число лабораторных исследований при ТНРМЖ входят:

  1. Общий анализ крови – в нем отмечаются повышение СОЭ, анемия.
  2. Цитологическое исследование биоптата железы – выявляются атипичные клетки.
  3. Иммуногистохимический анализ – дает отрицательный результат на три вида белков-рецепторов.

При развитии осложнений назначаются консультации других специалистов. Пациентка должна посетить терапевта, невролога, нейрохирурга и пр.

Лечение ТНРМЖ

Лечить тройной негативный тип рака молочной железы довольно непросто. В основе лечения злокачественных новообразований груди лежит использование гормональных препаратов. Однако трипл-отрицательная опухоль нечувствительна к ним, поэтому основное лечение – хирургическое или химиотерапевтическое.

Существует 2 методики оперативного вмешательства. Молочная железа удаляется полностью вместе с опухолью (мастэктомия) или же иссекается только новообразование в пределах здоровых тканей (лампэктомия). Второй тип операции более щадящий и проводится на 1-й и 2-й стадиях заболевания. После удаления назначается курс лучевой терапии.

Среди наиболее часто применяемых схем химиотерапии выделяют АС и FAC. Схема АС включает препараты Циклофосфан и Адриабластин. Схема FAC – Эпирубицин, Циклофосфан и 5-фторурацил. Индивидуальная схема и длительность курса подбираются лечащим врачом.

Прогноз и профилактика

Прогноз при новообразовании напрямую зависит от времени его выявления. Большое значение имеют следующие моменты:

  • размер и локализация опухоли;
  • поражение близлежащих групп лимфоузлов;
  • состояние окружающих тканей;
  • наличие метастазов и скорость их распространения.

Если новообразование появилось в наружной области молочной железы, исход считается более благоприятным. Такая опухоль легко удаляется хирургическим путем и шансы на излечение возрастают.

У женщин, которым поставлен диагноз ТНРМЖ и проведено лечение, сохраняется высокий риск повторного развития или появления метастазов в течение ближайших 3–5 лет. Увеличить выживаемость помогают лучевая терапия и химиопрепараты, назначенные после операции.

На сегодняшний день не выработано никаких специфических мер предупреждения тройного негативного рака. Чтобы снизить риск заболеваемости, необходимо придерживаться здорового образа жизни и соблюдать личную гигиену. Принимать оральные противозачаточные препараты нужно под контролем врача-гинеколога. Нижнее белье должно быть удобным и не травмировать грудь.

Обязательно ежегодно проходить скрининговые исследования, а также регулярно осматривать железы самостоятельно. При возникновении малейшего дискомфорта срочно обратиться к врачу.

Вопросы-ответы

Какой прогноз при тройном негативном раке молочной железы, если после лучевого лечения был достигнут полный регресс опухоли? Хотя в целом прогноз такого вида рака груди неблагоприятный, в данном случае возможно полное излечение.

Возможно ли выносить беременность и родить ребенка после лечения ТНРМЖ? Теоретически беременность и роды при этом диагнозе возможны. В практике онкологов известны случаи, когда беременность привела к улучшению состояния. Однако вопрос в каждом случае нужно решать индивидуально. Ранее считалось, что беременность возможна спустя 5 лет после мастэктомии, сейчас этот срок сокращен до 2 лет.

Какие осложнения могут возникнуть после химиотерапии? На фоне химиотерапии у пациенток отмечаются изменения картины крови (тромбоцитопения, снижение гемоглобина), пищеварительные расстройства (тошнота, рвота), выпадение волос, нарушения менструального цикла, общее недомогание и повышенная утомляемость.